小鼠避暗儀的實驗方法
實驗準備
熟悉環(huán)境:實驗前2天使小鼠熟悉實驗室環(huán)境,自由飲食、攝水。
分組設(shè)計:按分層隨機區(qū)組設(shè)計,使各組動物平均體重和性別比例相似。實驗小鼠按訓(xùn)練方法不同分為單次適應(yīng)單次電擊(MOS)、單次適應(yīng)限時訓(xùn)練(MOL)、多次適應(yīng)限時訓(xùn)練(MUL)3組,每組根據(jù)給藥不同分為對照(C)和模型(M)兩個亞組,最后共6組(每組n=9)。
儀器設(shè)置:避暗儀分為明、暗兩室,其間有一直徑為3cm的圓洞,兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部銅柵可通電,電壓通過按鈕調(diào)節(jié),一般為40V,50Hz。
訓(xùn)練方法
MOS法:訓(xùn)練在一天內(nèi)完成,先將小鼠放入避暗儀中適應(yīng)環(huán)境3min,訓(xùn)練時將小鼠背對洞口放入明室內(nèi),其進入暗室受到電擊即取出。
MOL法:訓(xùn)練在一天內(nèi)完成,小鼠適應(yīng)環(huán)境3min,訓(xùn)練3min。
MUL法:連續(xù)3天在同一時間將小鼠放入避暗儀中適應(yīng)3min,第三天適應(yīng)完成后開始訓(xùn)練,3min后取出。適應(yīng)環(huán)境和訓(xùn)練時任小鼠在明室和暗室之間自由穿梭,步入潛伏期大于3min者棄去不用。
測試方法
記錄指標:訓(xùn)練完成24h后將小鼠再次放入明室,記錄其第一次進入暗室所需的時間,即步入潛伏期(STL)和5min內(nèi)進入暗室的次數(shù),即錯誤次數(shù)(ETs)。若5min內(nèi)小鼠未進入暗室則STL記為300s,ETs記為0。
注意事項
實驗環(huán)境
環(huán)境清理:實驗前后注意清理點擊柵欄動物排泄物,排泄物會影響通電性。通過酒精擦拭、晾干盡可能去除上一只動物氣味,儀器設(shè)備需具備通風(fēng)系統(tǒng)。
減少干擾:在實驗過程中必須保持所有實驗程序一致,如屏蔽噪音、減少氣味刺激、調(diào)節(jié)光線等,實驗環(huán)境應(yīng)該安靜、昏暗,盡量輕巧抓取動物,減少對動物的刺激。關(guān)閉兩箱中間的門時要輕柔,不要制造過多外界的聲響影響動物行為。
實驗操作
動物適應(yīng):實驗開始前3-7天,每天抓取、輕撫動物,讓其適應(yīng)被實驗人員抓取,避免實驗過程中因?qū)嶒炄藛T抓取而造成動物處于應(yīng)激狀態(tài),造成實驗結(jié)果不可靠的問題。
電擊參數(shù):大鼠電流為0.65-1.8mA(推薦0.8mA),或電壓65-70V;小鼠電流為0.15-0.6mA(推薦0.25mA),或電壓30-36V,頻率為5-15Hz電流。
設(shè)備維護:實驗儀器底部的銅柵容易生銹,導(dǎo)致電阻增加,每次實驗前,應(yīng)以砂紙打磨光滑。